Nội dung câu chuyện phản ánh những góc khuất của các cầu thủ bóng đá, lên án hành vi gian lận, bán độ, cá cược, ăn chia…Đây là tập được nhiều khán giả chờ đợi bởi có sự góp mặt của các nam diễn viên hài “thần tượng” xuất thân từ chương trình Cười Xuyên Việt như: Dương Cường (nhóm X-Pro), Anh Tú (Quán quân CXV 2016), Tuấn Dũng (Á quân CXV 2016), Mạc Văn Khoa (Á quân CXV 2015), Hạnh Thảo (nhóm Buffalo),….Đặc biệt, tuần này, đội hình của 2 đội thám tử quy tụ nhiều gương mặt nổi tiếng như: ca sĩ Long Nhật, diễn viên Hồng Trang trong đội của Khả Như, diễn viên hài Tiết Cương và diễn viên Lan Phương trong đội của Nam Thư.
Thử thách dành cho 2 đội thám tử tuần này là phá giải vụ mưu sát cầu thủ Anh Tú (diễn viên Anh Tú) – đội trưởng của đội bóng đang chuẩn bị bước vào vòng Chung kết. Anh Tú là một cầu thủ tài năng, là chân sút chủ lực của đội, được ví như “hoàng tử sân cỏ”, tuy nhiên ngược lại với tài năng của mình, Anh Tú là một người bất chấp mọi thủ đoạn để đạt được mục đích như cố tình đá gãy chân của người chơi bóng giỏi hơn mình là Dũng (Tuấn Dũng) – con trai của HVL đội bóng (Quốc Khánh), khiến cho Dũng bị thương tật vĩnh viễn, không thể đá bóng được nữa, phải đi giúp việt vặt cho các cầu thủ trong đội. Anh Tú cũng dùng thủ đoạn để chinh phục Thảo (Hạnh Thảo) – con gái rượu của chủ tịch đội bóng và là người yêu của Quỳnh Lý. Không chỉ cướp người yêu của bạn, Anh Tú còn soán luôn chiếc băng đội trưởng của Quỳnh Lý. Ngoài những hành vi đê hèn đó, Tú còn tham gia vào đường dây cá độ bóng đá của Cường (Dương Cường) – anh trai của Thảo. Tuy nhiên, sau khi có được Thảo, Tú không muốn tiếp tục cá độ nên rút lui. Biết Cường rất sợ thông tin bán độ bị lọt ra ngoài nên Tú đã tống tiền Cường với một số tiền rất lớn. Chính vì hành động này, Tú đã phải chuốc lấy hậu quả.
Trong lúc Tú và Thảo đang nói chuyện với nhau thì điện bỗng dưng bị cắt, một bóng đen xông vào đánh Tú bị trọng thương và gãy chân. Trước khi hung thủ rời đi, Thảo chỉ kịp nghe những tiếng tíc tắc như tiếng đồng hồ hẹn giờ. Sau khi đưa Tú vào bệnh viện, Thảo quyết định điều tra kẻ đã hãm hại người yêu mình. 5 nhân vật tình nghi được cô xác định gồm có: Cường – anh trai của Thảo, HLV Khánh: Cha của Tuấn Dũng, Dũng: Người có động cơ trả thù rất lớn vì bị Tú hủy hoại tương lai và ước mơ đá bóng, Quỳnh Lý: người bị Anh Tú cướp người yêu và băng đội trưởng và Lý cũng là một thành viên của đường dây cá độ. Văn Khoa: thủ môn đội bóng, cũng tham gia cá độ và đang bị giang hồ uy hiếp giết vợ vì thiếu nợ 1 tỉ đồng.
Đội Nam Thư lần lượt tung 2 điệp viên Lan Phương và Tiết Cương vào điều tra các nhân vật tình nghi, mỗi điệp viên có thời gian 5 phút để hỏi. Đội Khả Như cũng tung 2 điệp viên là Hồng Trang và Long Nhật để khai thác các nhân vật.
Nếu như ở các mật vụ trước, động cơ là yếu tố quan trọng nhất để xác định thủ phạm thì ở mật vụ tuần này, ngoài động cơ thì yếu tố vật chứng và tình tiết rất quan trọng. Đạo diễn Diệp Tiên đã thử thách độ nhạy của 2 đội thám tử bằng chi tiết tiếng đồng hồ điện tử báo giờ vang lên lúc hung thủ ra tay với Tú. Chỉ tiếc là chi tiết này được phát hiện đầu tiên bởi chính…khán giả tại trường quay. Sau khi 4 điệp viên hỏi xong, 2 nữ thủ lĩnh ra tín hiệu trả lời. Thủ lĩnh Nam Thư giành quyền trả lời trước với kết quả thủ phạm là Cường. Đội của Khả Như đưa đáp án là thủ môn Khoa. Và Khoa chính là đáp án chính xác của mật vụ. Vì thiếu nợ giang hồ và bị bọn chúng dùng vợ mình để uy hiếp nên Khoa đã hỏi tiền của Cường. Lúc này, Cường đang bị Tú tống tiền nên không thể cho Khoa mượn, chính vì vậy Khoa mới ra tay ám sát Tú. Khoa cũng là người mang chiếc đồng hồ điện tử, lúc ra tay hãm hại Tú cũng là lúc chiếc đồng hồ báo giờ anh cho vợ mình uống thuốc.
Với kết quả chính xác nhưng do trả lời sau, đội Khả Như chiến thắng với phần thưởng là 15 triệu đồng. Đội của Nam Thư nhận được 10 triệu đồng. Ngoài Khả Như thì cố vấn Huỳnh Lập cũng là người đưa ra đáp án đúng. Trước khi các điệp viên điều tra, Huỳnh Lập đã khẳng định chỉ có Khoa là nhân vật có khả năng là thủ phạm cao nhất.
Chương trình Điệp Vụ Đối Đầu do Đài Truyền hình TP.HCM và Công ty Truyền thông Khang phối hợp thực hiện với sự tài trợ của nhãn hàng Number 1 Chanh. Dẫn chương trình là Én Vàng 2016 Liêu Hà Trinh. Tập tiếp theo của chương trình có tên “Mật vụ Mickey” sẽ phát sóng vào lúc 20h30 thứ Ba ngày 27/6 trên kênh HTV7.